HLA的DNA分型及評述
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? ? ? ? 1991年11月召開的11屆IHW上提出了HLA的DNA分型方法，使得HLA多態(tài)性的檢測有了突破性的進展，這些方法眾多，現(xiàn)列舉如下。
? ? ? ? 1、PCR-ASO（或PCR-SSO）：即PCR技術(shù)與等位基因特異順序的寡核苷酸（allelic specific oligonucleotide,ASO）或順序待異性的寡核苷酸（sequence specific oligonucleotide,SSO）探針相結(jié)合的方法。用PCR技術(shù)擴增從需定型細胞中抽提出的高度多態(tài)性基因片段的DNA，再與特異的序列明確的寡核苷酸（SSO）探針雜交，可區(qū)分特定編碼區(qū)DNA順序的細微差別。
? ? ? ? 2、PCR-RFLP：即PCR技術(shù)與限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragment lengthpolmorphism,RFLP）分析技術(shù)相結(jié)合。HLA抗原多態(tài)性是由其編碼基因的堿基順序不同的結(jié)果。不同個體HLa DNA堿基順序的差別造成了限制性內(nèi)切酶切位點的不同，從而導(dǎo)致DNA電泳后限制性片段長度上的多態(tài)性。主要步聚是經(jīng)印跡法轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，然后用已知的cDNA探針進行雜交，經(jīng)放射自顯影可查知相應(yīng)基因的何種長度的DNA酶切片段上。但此技術(shù)所用的內(nèi)切酶量大，方法復(fù)雜，耗費昂貴，已更先進、精確的以PCR為基礎(chǔ)的其它DNA分型所取代。
? ? ? ? 3、PCR-SSCP：即PCR與單鏈構(gòu)象多態(tài)性（single strand conformation polymorphism,SSCP）分析相結(jié)合的方法。其原理是單鏈DNA可形成穩(wěn)定的構(gòu)象，在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中其遷移率不僅與鏈的大小有關(guān)，而且受鏈的核苷酸順序的影響。由于使用相同引物擴增產(chǎn)物長度-致因而單鏈DNA在電泳中的遷移格局反映了單鏈核苷酸組成的不同，可十分敏感地檢測等位基因間DNA順序的微小差別，目前此技術(shù)已應(yīng)用于DP等位點的分型。
? ? ? ? 盡管采用DNA水平的HLA分型工作有了很大進展，但血清學分型，特別對I類基因產(chǎn)物仍是分型基礎(chǔ)。在可以預(yù)見的時期內(nèi)，DNA分型是無法取代它的。但應(yīng)該強調(diào)，在第11次IHW及隨后召開的WHO-HLA命名委員均已早明，今后凡屬新HLA特異性必須有相應(yīng)的DNA序列為基礎(chǔ)，否則不再予以命名。
? ? ? ? 應(yīng)該看到，HTC與PLT在對HLA-D和HLA-DP特異性檢測上有過肯定的貢獻，但由于方法較為復(fù)雜，耗時費力，且影響因素多，精確程度有限，已逐漸被眾多DNA水平定型方法所取代。
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